蛋白质含量测定方法

更新时间：2010-11-10 点击次数：11281

蛋白质含量测定方法一般来说，有以下五种：凯氏定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）、紫外吸收法和考马斯亮蓝法（Bradford法）。

表五种蛋白质含量测定方法的比较

方法	灵敏度	时间	原理	干扰物质	说明
凯氏定氮法（Kjedahl法）	灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％	费时 8～10小时	将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）	用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）	灵敏度低 1～20mg	中速 20~30分钟	多肽键＋碱性Cu²^＋®紫色络合物	硫酸铵； Tris缓冲液；某些氨基酸	用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法	较为灵敏 50～100mg	快速 5～10分钟	蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收	各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸	用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正
Folin－酚试剂法（Lowry法）	灵敏度高～5mg	慢速 40～60 分钟	双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原	硫酸铵； Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇	耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法（Bradford法）	灵敏度zui高 1～5mg	快速 5～15分钟	考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm	强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS	的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

从以上表格中可以得出，不同的方法有不同的特点和优势，如紫外吸收法测定时间快。但是综合起来，zui后一种考马斯亮蓝法（Bradford法）效率zui高，无论是测定时间，灵敏度还是受干扰程度，都是比较占优势的。

下面，我们来重点介绍一下其中一种蛋白质含量测定方法--凯氏定氮法。

凯氏定氮法（Kjedahl法）

首先将浓硫酸倒入样品中，边倒边摇晃，以使浓硫酸与样品充分接触，然后加热试剂。如果你需要加快实验进度，可以加入CuSO4作催化剂，这样，实验的反应时间就会大大缩短。CH₂COOH和H₂SO₄反应生成氨气，然后氨气又与H₂SO₄发生作用，固定了氮元素。这时我们得到了（NH₄）₂SO₄的溶液，然后我们可以用NaOH去跟硫酸铵反应，通过计算NaOH的使用量，就可以计算出氮的含量。下面是整个定氮法中发生的化学反应。

CH₂COOH+ 3H₂SO₄= 2CO₂ + 3SO₂ +4H₂O +NH₃ （1）

2NH₃ + H₂SO₄= （NH₄）₂SO₄ （2）

（NH₄）₂SO₄+ 2NaOH =2H₂O +Na₂SO₄ + 2NH₃ （3）

当我们得到氮的含量以后，我们就可以通过一定的计算，zui终算出蛋白质的含量。

凯氏定氮法常用于有机化合物中的氮含量的测定，是蛋白质含量测定的经典方法，虽然在测试过程中，试剂用量很大，但是，不可否认，它所适用的样品范围之广，测试结果之，都是*的。

现在，随着科技的发展，我们已经研究出带消化炉的凯氏定氮仪，它把定氮过程中的前两步骤通过仪器完成，方便了整个过程的实施。凯氏定氮仪能够自动的对样品进行消化，然后蒸馏，智能化完成，节省了时间和精力，提高了工作效率。这种具有有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。浙江托普仪器有限公司提供这种产品，24小时：。

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