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定氮仪等三款仪器对于蛋白质测定分析

更新时间:2013-05-21      点击次数:1937

    食品中蛋白质含量测定方法多有报导,如凯氏定氮仪法、酚试剂法、双缩尿法、光度法、甲醛滴定法和电流法等,但都存在着操作繁琐、费时等不足,而且文献报道基本是采用进口仪器,不适合一般实验室使用。经典的凯氏定氮仪法是在食品分析、营养和生化研究中广泛应用的方法,但操作也较为繁琐,耗时较长,作为本科学生实验无法在规定的时间内完成整个测定过程;同时大量试剂消耗造成资源浪费。
      本文利用控温消解炉同时可以消解多个样品,利用定氮仪自动完成加碱、定量蒸馏吸收。自动电位滴定仪具有准确度高和自动化程度高的特点。本文测定粮食中蛋白质的含量,对消解条件进行了摸索,并与国标法进行了比对。试剂:K2S04;CuS04•5H2O;H2S04;H3B03;NaOH(试剂均为分析纯)。精称0.1~0.5g粮食样品于干燥的消解管中,加入0.3gCuS04•5H20、1.0gK2S04和5mLHzS04摇匀,加热,消解;待反应液呈蓝绿色澄清透明后,继续加热10min后取下冷却至室温。将上述消解管直接卡于凯氏定氮仪,将装有20mL硼酸溶液的锥形瓶置于凯氏定氮仪吸收架,加碱至液体呈棕褐色,蒸馏至凯氏定氮仪发出信号后,取下锥形瓶,并置于全自动电位滴定仪,用硫酸标准溶液滴定,按上述方法考察试剂空白。按照GB/T5009.5-2003方法进行测定Ⅲ。
      实验考察了样品量与消化剂用量对测定结果的影响,当样品量为0.1~0.5g时;CuSO4、K2SO4和H2SO4试剂用量分别为0.39、1.0g和5mL时消解效果zui为理想,消解速度快,吸收及电位滴定效果较好,其测定值符合要求。当样品量过大时,则消解、吸收、滴定效果均不理想。设置不同的消解时间,测定样品的蛋白质含量。加热10min的测定值与国标法测定值接近。取蛋白质含量不同的4种样品,分别加标(硫酸铵)回收率实验,硫酸氨的回收率均在99.0%以上。采用本法与国标定氮法分别测定4种样品蛋白质含量。结果表明,两种方法无显着性差异(P=0.95)时,量值<2.30,符合要求。取蛋白质含量不同的4种样品,平行测定5次,相对平均偏差(RSD)均小于1.0%,表明该法的精密度良好。
      本方法利用三种仪器测量食品中蛋白质的含量,具有较高的准确度和精密度,操作简便、快速、省时、省力,设备价格低,易于推广,且试剂用量少,降低实验成本,同时也减少了对环境的污染,这不仅能使本科学生在规定时间内完成整个实验过程,还可以让学生在一般基础实验室学到、用到较先进的仪器。

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