标准类别：GB-国家标准，关键词：饲料霉菌检验方法，标准号：GB13092-91，标准名称：饲料中霉菌检验方法，标准分类：农业饲料标准。

      1 主题内容与适用范围
      本标准规定了饲料中霉菌的检验方法。
      本标准适用于饲料中霉菌的检验。
      2 原理
      根据霉菌生理特性，选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平皿计数方法，测定霉菌数。
      3 设备及材料
      3.1 天平；感量1g，zui大秤量1000g。
      3.2 显微镜：1500×。
      3.3 温箱：25-28±1℃ 。
      3.4 冰箱：普通冰箱。
      3.5 高压灭菌器：2.5kg。
      3.6 干燥箱：50-250±1℃。
      3.7 水浴锅：45-77±1℃。
      3.8 振荡器：往复式。
      3.9 微型混合器；2900r/min。
      3.10 电炉。
      3.11 酒精灯。
      3.12 接种棒：镍铬丝。
      3.13 温度计：100+1℃。
      3.14 载玻片。
      3.15 盖玻片。
      3.16 乳钵。
      3.17 试管架。
      3.18 玻璃三角瓶：250，500mL。
      3.19 试管：15×150mm。
      3.20 平皿：直径9cm。
      3.21 吸管：1，10mL。
      3.22 玻珠：直径5mm。
      3.23 广口瓶：100，500mL。
      3.24 金属勺、刀等。
      3.25 橡皮乳头。
      4 培养基和稀释液
      4.1 高盐察氏培养基。
      4.2 稀释液。
      4.3 试验室常用消毒药品。
      5 检验程序
      霉菌检验程序如下：
      检样
      |
      --------------------------
      ↓ ↓ ↓
      磨碎←--块状饲料 谷物饲料 粉状饲料
      | 原料 |
      | ↓ |
      --→ 加无菌稀释液10倍稀释振荡30min ←--
      ↓
      做成几个当倍数的稀释液
      ↓
      选择3个适当稀释度、各以1ml加入灭菌平皿内
      ↓
      每皿加入适量高盐察氏培养基
      ↓
      25-28±1℃培养1周
      ↓
      菌落计数
      ↓
      报告
      6 操作步骤
      6.1 采样
      采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。
      根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混合。
      海运进口饲料采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛饲料超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。
      6.2 以无菌操作称取样品25g（或25mL），放入含有225mL灭菌稀释液的玻塞三角瓶中，置振荡器上，振摇30min，即为1∶10的稀释液。
      6.3
      用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入带玻璃珠的试管中，置微型混合器上混合3min，或注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子分散开。
      6.4 取1mL1 10稀释液，注入含有 9mL灭菌稀释液试管中，另换一支吸管吹吸5次，此液为1100稀释液。
      6.5 按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支
      1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适稀释度，分别在作10倍稀释的同时，吸取
      1mL。稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿，然后将凉至45℃左右的高盐察氏培养基注入平皿中，充分混合，待琼脂凝固后，倒臂于25-28±l
      温箱中，培养3d后开始观察，应培养观察一周。
      6.6 计算方法
      通常选择菌落数在30-100个之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升）检样中所含霉菌数。
      6.7 报告
      每克（或每毫升）饲料中含霉菌数以个/g（个 /mL）表示。
      附 录 A
      培养基和稀释液制备
      （补充件）
      除特殊规定外，本标准所用化学试剂为分析纯或化学纯；生物制剂为细菌培养用；水为蒸馏水。
      A1 高盐察氏培养基
      A1.1成分
      硝酸钠（GB636）
      磷酸二氢钾（GB1274） 1g
      硫酸镁（MgSO4·7H20，GB671） 0.5g
      氯化钾（GB646） 0.5g
      硫酸亚铁（GB664） 0.01g
      氯化钠（GB1266） 60g
      蔗糖（HG3—1001） 30g
      琼脂 20g
      蒸馏水 1000mL
      A1.2制法
      加热溶解，分装后，115 高压灭菌 30min。必要时，可酌量增加琼脂。
      A2 稀释液
      A2.1成分
      氯化钠（GB1266） 8.5g
      蒸馏水 1000mL
      A2.2制法
      加热溶解，分装后，121 高压灭菌30min。